Ở trận ra quân tại Mỹ mở rộng 2021, Novak Djokovic chỉ phải đối đầu với tay vợt trẻ mới lần đầu tham dự một giải Grand Slam, đó là Holger Rune. Với đẳng cấp của tay vợt số 1 thế giới, Djokovic nhanh chóng có được chiến thắng áp đảo 6-1 ở set đấu đầu tiên.

Tuy nhiên, sang set 2 thì bất ngờ đã xảy ra. Tưởng chừng Djokovic sẽ tiếp tục có 1 set đấu dễ dàng khi giành break ở game 2, thế nhưng Holger Rune đã thi đấu hết sức kiên cường và giành 2 break liên tiếp. 2 tay vợt phải bước vào loạt tie-brek để phân định thắng thua tại set đấu này. Và tại đây, Holger Rune đã khiến Djokovic phải chịu thua với tỉ số 5-7.

Sau khi để thua set 2, Djokovic bừng tỉnh và thi đấu thận trọng hơn với đúng phong độ của mình trong khi Rune gặp phải chấn thương. Tay vợt số 1 thế giới giành chiến thắng áp đảo trong cả set 3 và 4 với tỉ số lần lượt là 6-2 và 6-1.

Chung cuộc, Novak Djokovic giành chiến thắng trước Holger Rune với tỉ số 3-1 qua đó giành quyền đi tiếp. Tại vòng 2, đối thủ của tay vợt người Serbia sẽ là Tallon Griekspoor xếp hạng 110 ATP.